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常用的荧光染料介绍
发布时间: 2018-03-12    被读次数: 136

一、免疫荧光标记常用的荧光染料

  FITC(异硫氰酸荧光素):绿色530nm

  PE(藻红蛋白):橙黄色575nm

  PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白):深红色675nm

  PI(碘化丙啶):橙红色620nm

  488nm波长的氩离子激光激发

  APC(别藻青蛋白):红色660nm

  630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发

    Cy3:激发波长488nm,最大发射波长570nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)FL2通道检测;3)为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于PE。

    Cy5:激发波长633/635nm,最大发射波长670nm。1)其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)FL4通道检测;3)小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于APC。4)与单核和粒细胞非特异性结合多,易出现假阳性结果。

二、免疫荧光标记

  常用的标记染色为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色。在进行双参数或多参数分析时,常常需要进行荧光抗体的组合标记,目前已经有双色、三色以及四色标记。

三、细胞自发荧光

  自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生自发荧光的分子(例如核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。

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